冰冻切片he染色的具体步骤及原理

大家好，今天咱们接着上期给大家介绍冰冻切片的制作步骤。本视频由普拉特则生物病理实验平台分享，科研实验服务首选普拉特则 冰冻切片是在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片观察的方法。其制作主要分为取材、速冻、固定、切片四个步骤。 将要进行冰冻切片观察的组织尽可能快的采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化，影响后期染色分析结果。 第二步就是速冻组织。一、将取好的组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内。二、如组织块小，可适量加 oct 包埋剂，静默组织，将特制小盒缓缓平放入成 液氮的小杯内。三、当和底部接触液氮时，即开始计划沸腾，此时小盒保持原位，切勿进入液氮中。大约十到二十秒，组织即迅速冰结成块。四、再制成冻块，可置入恒冷箱切片机冰冻切片。五、若需要保存， 应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入零下八十摄氏度冰箱注存备用。 第三步是组织固定一样品拖上涂一层 oct， 包埋胶后，将速冻组织置于其上 四摄氏度。冰箱预冷五到十分钟，让 oct 胶浸透组织。二、取下组织，置于稀薄或者拨片上，样品托速冻。三、组织置于样品托上，其上再添一层 oct 胶已完全覆盖为宜，速冻架披上三十分钟。 最后一步就是进行组织切片。一、恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内，固切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至五到十微米。二、切片时 低温，室内温度以零下十五摄氏度到零下二十摄氏度为一，温度过低组织易破碎。抗卷板的位置及角度要适当 在拨片服帖组织切片，切勿上下移动。三、切好室温放置三十分钟后入四摄氏度，丙酮固定五到十分钟，烘箱干燥二十分钟， pbs 洗五分钟乘以三四进行抗原热修复。微波热修复也可，室温自然冷却。 好啦，那冰冻切片步骤就讲完了，记得点个关注，下期我们接着讲冰冻切片制作时的注意事项，咱们下期见！

一个视频带你走进光怪陆离的病理事件。快速冰冻切片你了解多少？让我们一起学习一下吧！一场手术顺利完成，患者重获健康的同时，还留下了最痛的纪念品。如果是或者疑似恶性肿瘤等，则要前往病理科做成切片，供医生进一步研究诊断。 接下来带你了解一下快速冰冻切片。首先进行包埋，将脱好水的组织取出，用绿纸将表面水烧吸干后，切面朝上，放于包埋台上，组织周围滴上 oct 包埋剂， 将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上，速冻包埋温度控制可以参考下图。 第二步，待 oct 变白变硬后即可进行切片。将包埋台固定于切片机上，先粗切，将组织面修切平整后即可开始切片。 在这里需要注意组织发萃的处理，一般是组织冷冻过度，可将冰冻组织连同支撑器取出来，在室温中停留片刻再进行切片，也可调高冰冻点， 切片厚度约为八到十微米。 将干净的在拨片平放于切出的组织片上方，即可将组织贴于在拨片上。 在这里给大家分享一些在拨片粘贴技巧，一年复在，拨片应放在常温，不可放在冷冻室中。二、贴片时，在拨片与刀面的角度要成三十度到四十五度，依靠在拨片的热量将组织切片吸上来，迅速抬起，切记压片 零下二十摄氏度，保存备用。三、染色 染色步骤依次为一，切片固定三十秒到一分钟水洗。二、染苏沐素三到五分钟分化。三、反蓝二十秒 红染色十到二十秒。四、脱水透明中性树胶风固。 最后就是观察啦，对染色好的冰冻切片进行观察，进行快速病理诊断。 让我们一起看一下小鼠组织的细胞形态吧！ 更多内容敬请关注科想家！

h 一、染色实验流程一、切片拖拉至水。二、甲苯拖拉三缸，每缸五分钟， 无水乙醇百分之九十五乙醇、百分之八十五乙醇、百分之七十五乙醇、百分之六十五乙醇，各浸泡一分钟， 流水冲洗，注意不要让流水直接冲洗组织，防止掉片。二、苏木素染色切片入苏木素染液染五分钟左右， 水洗 百分之一盐酸乙醇分化两秒，水洗百分之一氨水。反蓝， 苏木素染色时间不固定，可以通过反蓝后镜下观察细胞和颜色来判断染色是否充分。水洗三、一、红染色 乳衣红染液中染色十秒左右， 将切片依次放入百分之七十五乙醇二到三秒，百分之八十五乙醇二到三秒， 百分之九十五乙醇二到三秒 无水乙醇一分钟。四、封片， 切片晾干后中性塑胶封片。

医学博士带你体验科研实验之组织切片一尺一眼色，这是一眼色的主要步骤，网上也可以查到很多，这主要是我们实验室的版本。先是依据这两种方法对不同类型样本进行预处理，随后再根据步骤进行一眼色。 主要染色过程要在挂绳通风柜里操作，并像我一样戴好口罩撕了切片要进行泼辣盒到梯度乙醇覆水，根据步骤把片子放入不同溶液的眼缸中进行浸泡，每组溶液浸泡时间大约为五分钟。在切片完成覆水后进行眼色。将苏木术眼液倒入新眼缸，随后切片放入缸中进行苏木术眼色，计时四分钟。 书怒书演完后，立即进行自来水流水冲洗，清洗完后进行盐酸溶液分化，即反蓝液反蓝隔二到三秒钟。随后将一红饮料倒入新眼缸中， 再演一红。前片子要经过高浓度酒精溶液脱水，演完后再经过两次无水乙醇溶液脱水，随后还要经过两次二甲苯溶液进行透明。注意二甲苯溶液有毒，废弃时应进行回收， 记得演完后要将漏出的眼液擦干净。最后是进行封篇，大家可以看我这样操作能够减少气泡产生， 来近距离再看一次。 最后实验室楼下的小黑猫祝大家所有都顺利，猫猫！

今日课堂一分钟了解 h 一染色法 h 一染色法是十辣切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与包制内的核酸着紫蓝色。 一红为三性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 he 染色法是组织学、胚胎学、病理学、教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。切片经 he 染色后要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底， 封片后成白色雾状，静下观察模糊不清且容易褪色。切片一至二级无水，以纯脱水，也可使用石碳酸二甲粉进行脱水。石碳酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲粉以使石碳酸完全除去。

h e 染色实验原理及操作演示首先将切片常规脱蜡至水，依次将石蜡切片放入二甲本和乙醇中。 h e 染色原理苏木晶伊红染色简称 h e 染色。苏木晶染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与包制内的荷塘体珠紫蓝色。依红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外机制中的成分着红色。下面开始 h e 染色，滴加苏木素染色液染色二点五分钟， 用蒸馏水冲洗三十秒，洗去多余的染液， 接着低加分化也分化几秒。 将切片放置于自来水中的染色架上，浸泡十五分钟， 取出反蓝后的切片，吸走多余的水分。 d。 加一红染色六到七分钟， 用蒸馏水冲洗。 再次将样品放入染色架， 依次将石蜡切片放入二甲本和乙醇中，脱水透明。步骤百分之九十五，无水乙醇二到三秒，无水乙醇一一分钟，无水乙醇二二分钟，无水乙醇三三分钟，二甲本一、二、三各五分钟。取出脱水透明后的切片， 低加少许的中性塑胶风固。 最后使用显微镜盖拨片进行封片。 以上就是 h 染色的全部过程啦！